其一,在c8反相液相色譜柱上有很多填料,包括聚合物,聚合物表面涂上硅膠和氧化鋁,無(wú)機-有機混合物,涂層氧化鋯和石墨化碳都存在于這些鍵合硅膠上;
為增加c8反相液相色譜柱的應用,常利用各種流動(dòng)相和添加物作用于反相色譜柱,添加物可以改變或修飾填料的表面,有時(shí)候還有可能會(huì )污染鍵合相表面;
硅膠表面的疏水鍵合相是硅烷醇,殘留的硅烷醇存在于所有的硅膠鍵合填料中,這些硅烷醇具有弱酸性,因此能與某些待分析物反應成為基質(zhì)成分。
其二,樣品中含有的鹽、脂質(zhì)、含脂物質(zhì)、腐質(zhì)酸、疏水蛋白質(zhì)和其它一些物質(zhì)是一些可能在使用時(shí)與HPLC柱發(fā)生相互作用的物質(zhì)。部分非常疏水的樣品基質(zhì),如:玉米油,高芳香物質(zhì)和蠟能粘住固定相裝填表面并且改變其性質(zhì);
含有蛋白質(zhì)物質(zhì)的生物流體也能吸附在填料表面。有些物質(zhì)有比待測物或少或大的保留值,那些保留值較小的物質(zhì)如鹽類(lèi)一般來(lái)說(shuō)在空體積時(shí)就被沖出色譜柱,這些非目標產(chǎn)物的干擾能被檢測器檢測到而且能形成色譜峰,氣泡,基線(xiàn)上移或者是負峰。如果樣品成分在柱子中有很強的保留而且流動(dòng)相溶液成分不足以把這些物質(zhì)洗脫下來(lái),多次上樣后,這些吸附在柱子表面的物質(zhì)通常就會(huì )積累在柱頭。這些行為通常只有通過(guò)平行實(shí)驗才能發(fā)現。有著(zhù)中等保留值的樣品能被緩慢洗出而且表現為寬峰,基線(xiàn)擾動(dòng),或者基線(xiàn)漂移。