1、離子對試劑作用原理
  “加入離子對試劑后，它可以與待分析的物質(zhì)（多為在溶液狀態(tài)時(shí)顯以與離子對試劑相反的電荷）結合成離子對而呈中性，這樣非極性就表現出來(lái)，從而在色譜柱上有保留行為。”
   我覺(jué)得離子對試劑很像膠黏劑，一頭以離子吸引住待測物（也是離子），另一頭以碳鏈與固定性作用，從而把待測物保持在固定相上 。它的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，都是因為這樣的特性。
2、試劑選擇
   “離子對分為正離子對和負離子對，分析酸性樣品（確切的說(shuō)應該是作用基團）用正離子對試劑，分析堿性樣品用負離子對試劑。
  正離子對試劑可以吸附帶負電荷的樣品組分，負離子對試劑反之。戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉……十二烷基磺酸鈉都屬于負離子對試劑；四丁基溴化銨、四丁基硫酸氫銨一類(lèi)屬于正離子對試劑。
   離子對要考慮樣品體系的復雜性和干擾物的特性，先用原則一般盡可能使用碳鏈短的先，這樣可以避免強保留造成對柱子效能的影響，同時(shí)，濃度盡可能的低，以保證對柱子填料的穩定性影響zui小及清洗方便。”
  看來(lái)做實(shí)驗下手輕點(diǎn)兒好，從碳鏈短的開(kāi)始，從低濃度開(kāi)始，不行再慢慢加。不過(guò)這次的使用經(jīng)驗是從碳鏈長(cháng)度中等的開(kāi)始，可以更快看到效果，節約摸索分析條件的時(shí)間。同時(shí)流動(dòng)相PH值盡可能低以確保離子化程度。
 
3、試劑的使用
  “離子對試劑不一定是表面活性劑，如己烷和庚烷磺酸鈉，又如三乙胺或四丁基溴化胺，不具表面活性作用。所以用己烷和庚烷鹽就沒(méi)有泡末，用四丁基溴化胺也不產(chǎn)生氣泡。十二烷基磺酸鈉（或硫酸鈉），或者十六烷基溴化鈉（CTAB,一種做陰離子用的陽(yáng)性表面活性劑），在濃度高的時(shí)候容易產(chǎn)上泡末。做HPLC時(shí)流動(dòng)相里加的SDS或CTAB濃度一般不會(huì )太高，一般在0.1%以下，而且流動(dòng)相里有甲醇等有機溶劑，高濃度的有機溶劑有破乳的作用，因此，混合后的流動(dòng)相泡末應該不會(huì )很多。另外，做電泳加入的SDS量很大的比如做蛋白質(zhì)SDS膠，或者毛細管電泳里的MECC，SDS濃度很高，而且沒(méi)有或者有很少比例的有機改性劑，當然會(huì )有氣泡，跟HPLC不*相同。”
達人們的意思我看明白了，就是有點(diǎn)泡沫不要怕，確保溶液搖勻就好。
使用離子對試劑時(shí)，調節保留時(shí)間的方式與普通反相不同，變化有機相比例沒(méi)有改變PH值來(lái)得有效。
     “當流動(dòng)相PH值較高時(shí)，樣品以中性形式存在，那么正電荷較少，相應的保留較弱；當流動(dòng)相PH值較低時(shí)，樣品便以質(zhì)子堿H+形式的離子狀態(tài)存在，那么正電荷與固定相上帶負電荷的-SO3強烈吸附，相應的保留會(huì )非常強。”
  “再說(shuō)明一下B物質(zhì)的pKa，其值為10.5，在pH為4.5、3.8時(shí)都以離子態(tài)存在，這點(diǎn)沒(méi)錯，雖然都是離子態(tài)，都是99%以上，但從量上說(shuō)還是有點(diǎn)不一樣的。任何物質(zhì)以離子態(tài)存在時(shí)都有一個(gè)平衡的狀態(tài)：B＋（H＋）＝＝（BH＋），這里存在著(zhù)一個(gè)平衡常數K（或者說(shuō)離解常數），于是pH不同時(shí)，H＋不同，對應的B、BH＋也不同。所以才會(huì )出現pH不同，保留值會(huì )不同。
  另外我認為4.5和3.8的pH相差不大，其改變對物質(zhì)的保留值影響不會(huì )很大，因為在流動(dòng)相中還受到很多因素的影響。”