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網(wǎng)站首頁(yè)技術(shù)支持 ◇ 離子對試劑作用原理及使用
離子對試劑作用原理及使用
  • 更新日期:2017-02-07     信息來(lái)源:本站      瀏覽次數:5947
    • 1、離子對試劑作用原理
        “加入離子對試劑后,它可以與待分析的物質(zhì)(多為在溶液狀態(tài)時(shí)顯以與離子對試劑相反的電荷)結合成離子對而呈中性,這樣非極性就表現出來(lái),從而在色譜柱上有保留行為。”
         我覺(jué)得離子對試劑很像膠黏劑,一頭以離子吸引住待測物(也是離子),另一頭以碳鏈與固定性作用,從而把待測物保持在固定相上 。它的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),都是因為這樣的特性。
      2、試劑選擇
         “離子對分為正離子對和負離子對,分析酸性樣品(確切的說(shuō)應該是作用基團)用正離子對試劑,分析堿性樣品用負離子對試劑。
        正離子對試劑可以吸附帶負電荷的樣品組分,負離子對試劑反之。戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉……十二烷基磺酸鈉都屬于負離子對試劑;四丁基溴化銨、四丁基硫酸氫銨一類(lèi)屬于正離子對試劑。
         離子對要考慮樣品體系的復雜性和干擾物的特性,先用原則一般盡可能使用碳鏈短的先,這樣可以避免強保留造成對柱子效能的影響,同時(shí),濃度盡可能的低,以保證對柱子填料的穩定性影響zui小及清洗方便。”
        看來(lái)做實(shí)驗下手輕點(diǎn)兒好,從碳鏈短的開(kāi)始,從低濃度開(kāi)始,不行再慢慢加。不過(guò)這次的使用經(jīng)驗是從碳鏈長(cháng)度中等的開(kāi)始,可以更快看到效果,節約摸索分析條件的時(shí)間。同時(shí)流動(dòng)相PH值盡可能低以確保離子化程度。
       
      3、試劑的使用
        “離子對試劑不一定是表面活性劑,如己烷和庚烷磺酸鈉,又如三乙胺或四丁基溴化胺,不具表面活性作用。所以用己烷和庚烷鹽就沒(méi)有泡末,用四丁基溴化胺也不產(chǎn)生氣泡。十二烷基磺酸鈉(或硫酸鈉),或者十六烷基溴化鈉(CTAB,一種做陰離子用的陽(yáng)性表面活性劑),在濃度高的時(shí)候容易產(chǎn)上泡末。做HPLC時(shí)流動(dòng)相里加的SDS或CTAB濃度一般不會(huì )太高,一般在0.1%以下,而且流動(dòng)相里有甲醇等有機溶劑,高濃度的有機溶劑有破乳的作用,因此,混合后的流動(dòng)相泡末應該不會(huì )很多。另外,做電泳加入的SDS量很大的比如做蛋白質(zhì)SDS膠,或者毛細管電泳里的MECC,SDS濃度很高,而且沒(méi)有或者有很少比例的有機改性劑,當然會(huì )有氣泡,跟HPLC不*相同。”
      達人們的意思我看明白了,就是有點(diǎn)泡沫不要怕,確保溶液搖勻就好。
      使用離子對試劑時(shí),調節保留時(shí)間的方式與普通反相不同,變化有機相比例沒(méi)有改變PH值來(lái)得有效。
           “當流動(dòng)相PH值較高時(shí),樣品以中性形式存在,那么正電荷較少,相應的保留較弱;當流動(dòng)相PH值較低時(shí),樣品便以質(zhì)子堿H+形式的離子狀態(tài)存在,那么正電荷與固定相上帶負電荷的-SO3強烈吸附,相應的保留會(huì )非常強。”
        “再說(shuō)明一下B物質(zhì)的pKa,其值為10.5,在pH為4.5、3.8時(shí)都以離子態(tài)存在,這點(diǎn)沒(méi)錯,雖然都是離子態(tài),都是99%以上,但從量上說(shuō)還是有點(diǎn)不一樣的。任何物質(zhì)以離子態(tài)存在時(shí)都有一個(gè)平衡的狀態(tài):B+(H+)==(BH+),這里存在著(zhù)一個(gè)平衡常數K(或者說(shuō)離解常數),于是pH不同時(shí),H+不同,對應的B、BH+也不同。所以才會(huì )出現pH不同,保留值會(huì )不同。
        另外我認為4.5和3.8的pH相差不大,其改變對物質(zhì)的保留值影響不會(huì )很大,因為在流動(dòng)相中還受到很多因素的影響。”

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