C8反相液相色譜柱在液相色譜中是應用zui廣泛的技術(shù)，主要是因為它適用于分析極大多數的非極性物質(zhì)和離子化合物。大多數用于反相色譜的固定相都是天然的疏水物質(zhì)，因此，分析物是按照它們與固定相的疏水相互作用的大小來(lái)分離的。
C8反相液相色譜柱的應用，常利用各種流動(dòng)相和添加物作用于反相色譜柱，添加物可以改變或修飾填料的表面，有時(shí)候還有可能會(huì )污染鍵合相表面；硅膠表面的疏水鍵合相是硅烷醇，殘留的硅烷醇存在于所有的硅膠鍵合填料中，這些硅烷醇具有弱酸性，因此能與某些待分析物反應成為基質(zhì)成分。
1.C8反相液相色譜柱的平衡
C8反相液相色譜柱由工廠(chǎng)測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應先使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。一定確保分析樣品所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相來(lái)平衡色譜柱，就會(huì )在處理問(wèn)題方面獲得zui大的”補償”，而且C8反相液相色譜柱的壽命也會(huì )變得更長(cháng)。
操作步驟：
a.平衡開(kāi)始時(shí)將流速緩慢地提高，用反相液相色譜柱直到獲得穩定的基線(xiàn)（緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長(cháng)的時(shí)間來(lái)平衡）
b.如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應注意用純水”過(guò)渡”即每天分析開(kāi)始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡；分析結束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。
2.C8反相液相色譜柱的再生
長(cháng)期使用的色譜柱，往往柱效會(huì )下降（柱子的理論塔板數減低）?？梢詫ιV柱進(jìn)行再生，在有條件的實(shí)驗室應使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生。
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