HILIC色譜柱的分離機制

分離機理在目前還存在著(zhù)爭議，主要包括以下三個(gè)方面：

（1）分配機理

（2）離子交換

（3）偶極-偶極相互作用。更多的試驗現象則表明HILIC色譜柱的保留機理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級效應，很難將其區分開(kāi)來(lái)。

HILIC色譜柱影響保留的主要因素

普遍認為HILIC色譜柱保留行為受到多種參數的影響，如固定相的官能團、有機改性劑的含量、流速、柱溫、流動(dòng)相緩沖體系的pH值、緩沖鹽的種類(lèi)和濃度。

 

影響樣品在固定相上的保留行為的主要因素都是流動(dòng)相中有機相的比例，例如乙腈的含量的增加會(huì )顯著(zhù)增加樣品的保留因子。在HILIC色譜柱分離模式中，溶劑洗脫能力由弱到強為：丙酮<乙腈<異丙醇<乙醇<甲醇<水, 流動(dòng)相中水是較強的洗脫溶劑。一般采用乙腈-水體系作為流動(dòng)相，其中水相的比例為5%-40%以保證其顯著(zhù)的親水作用。將流動(dòng)相中的水相用甲醇、乙醇、異丙醇代替，隨著(zhù)流動(dòng)相極性的減小，待測物在柱上的保留就會(huì )增強。