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色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此可以說(shuō)擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。能否找到合適的色譜柱,關(guān)系到整個(gè)分析工作的成敗。目前市場(chǎng)上反相色譜柱有C18、C4、C8、C30、氰基柱、硅膠柱、氨基柱、苯基柱等。本文主要介紹C18柱。
C18色譜柱簡(jiǎn)稱(chēng)ODS柱(十八烷基鍵合硅膠填料)是一種長(cháng)鏈烷基鍵合相有較高的碳含量和更好的疏水性,對各種類(lèi)型的生物大分子有更強的適應能力。但因鍵合方式不同、粒徑不同、長(cháng)短不同,內徑差異等方面因素,呈現出不同的選擇性,分離效果也參差不齊。分析化學(xué)中可以根據pH環(huán)境、流動(dòng)相極性、色譜柱的分類(lèi)系統、藥物極性等來(lái)選擇合適的C18色譜柱。
選擇C18色譜柱時(shí)應注意:
1)在pH值正常范圍內(2~8)可選用現代高純硅膠色譜柱,具有峰形好,重現性高和壽命長(cháng)的特點(diǎn),選用較短的柱子可以提高分離效率,選用較長(cháng)的柱子可以增加保留,選用小顆粒度的填料可以提高分離度,對分子量大的組分宜選用大孔徑填料的色譜柱。
2)分離極性大的組分(流動(dòng)相水相過(guò)大)采用AQ類(lèi)似的色譜柱。
3)分離生物堿類(lèi)的化合物選用經(jīng)過(guò)烷基化處理封口的填料可防止堿性化合物的拖尾現象。
4)酸性條件下(pH小于2)選用Zorbax Stable Bond C18類(lèi)色譜柱或者寬pH值色譜柱。
5)低端堿性條件下(pH大于8)選用Zorbax Extend-C18、XBridge,XSelect,Atlantis,Symmetry,XTerra,SunFire等色譜柱。
6)選用含碳量高的柱子可以增加保留。
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