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網(wǎng)站首頁(yè)技術(shù)支持 ◇ 花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測——UPLC-MS/MS法
花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測——UPLC-MS/MS法
  • 更新日期:2016-09-09     信息來(lái)源:本站      瀏覽次數:3873
    •  

      黃曲霉毒素包括B1、B2、G1、G2、M1、M2等多種形式,但是目前有關(guān)這些毒素的檢測方法很少,且以酶聯(lián)免疫(ELISA)法和薄層色譜(TLC)法等篩選方法檢測黃曲霉毒素B1為主;液相色譜法(HPLC)容易受到雜質(zhì)干擾,而且檢出限很難達到要求。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)是一種集分離和多組分定性、定量于一體的系統,已成為近年來(lái)研究黃曲霉毒素檢測的主要方向,并已經(jīng)應用到黃曲霉毒素的污染檢測中。

      方法優(yōu)勢:

      迪馬科技開(kāi)發(fā)的《花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測-UPLC-MS/MS法》采用固相萃取-UPLC-MS/MS法,可同時(shí)檢測5種黃曲霉毒素,并能夠達到準確定性定量,檢出限是0.5 μg/kg,遠低于國家標準《GB 2761-2011 食品安全國家標準 食品中真菌毒素*》;對比國標方法《GB/T 18979-2003 食品中黃曲霉毒素的測定 免疫親和層析凈化液相色譜法和熒光光度法》,本方案具有:

      1. 前處理步驟簡(jiǎn)單、回收率高、方法穩定性好、凈化效果優(yōu)異等特點(diǎn);

      2. 避免了免疫親和柱容易受環(huán)境影響而引起黃曲霉毒素回收率低和凈化效果不好的弊端,保證了實(shí)驗結果的重現性和準確性;

      3. 過(guò)柱方法簡(jiǎn)單易操作,對操作人員要求不高,檢測成本相對較低,能被很多企事業(yè)單位采用。

      以下為詳細解決方案,敬請參考!

      花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測——UPLC-MS/MS法

      1、適用范圍

      本方案適用于花生油、小米、高粱、糙米等樣品中黃曲霉毒素的檢測。本方案定量限是0.5 μg/kg。

      2、提取

      稱(chēng)取2.0 g 樣品,加入8 mL 85%乙腈水,振蕩2 min,超聲10 min,6000 rpm離心2 min,收集上清液,待凈化。

      3、凈化——ProElut AFT-3 12 mL(Cat#:65915)

      將待凈化液加入柱中,收集2 mL流出液,在50 ℃水浴下減壓蒸干,用初始流動(dòng)相定容到1 mL,過(guò)膜上機分析。

      4、分析條件

      4.1 UPLC 條件:

      色譜柱:Leapsil C18,100 × 2.1 mm,2.7 μm (Cat#:86005)

      流  速:0.3 mL/min   

      進(jìn)樣量:5 μL  

      柱  溫:40 ℃

      流動(dòng)相:乙腈:0.1% 甲酸水

      梯度

      時(shí)間(min)

      0

      6

      7

      15

      乙腈(%)

      30

      70

      30

      30

      0.1% 甲酸水(%)

      70

      30

      70

      70

      4.2質(zhì)譜條件:

      電離模式:ESI

      掃描方式:正離子掃描

      檢測方式:多反應監測

      電噴霧電壓:5500 V

      霧化氣壓力:50 psi

      輔助氣壓力:50 psi

      氣簾氣壓力:20 psi

      離子源溫度:500 ℃

      定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見(jiàn)下表

      藥物名稱(chēng)

      定性離子對

      (m/z)

      (母離子/子離子)

      定量離子對

      (m/z)

      (母離子/子離子)

      碰撞氣能量/eV

      去簇電壓/V

      AFB1

      313.0/241.0

      313.0/241.0

      51

      78

      313.0/285.0

      51

      AFB2

      315.0/259.0

      315.0/259.0

      40

      77

      315.0/287.0

      40

      AFG1

      329.0/200.0

      329.0/200.0

      56

      74

      329.0/243.0

      56

      AFG2

      331.0/189.0

      331.0/189.0

      60

      61

      331.0/313.0

      60

      AFM1

      329.0/273.0

      329.0/273.0

      40

      64

      329.0/243.0

      40

      5、添加回收結果

      糧谷及油類(lèi)樣品中黃曲霉毒素檢測(添加水平10 μg/kg)的添加回收結果(%)

      基質(zhì)

      AFB1

      AFB2

      AFG1

      AFG2

      AFM1

      花生油

      94.0

      102.4

      106.6

      93.2

      96.2

      糙米

      96.0

      99.2

      87.2

      108.4

      87.6

      高粱

      94.4

      93.8

      86.4

      95.0

      92.6

      小米

      96.8

      90.6

      112.8

      91.4

      89.0

       

      1.jpg

      5種黃曲霉毒素10 μg/L MRM色譜圖

       2.jpg

      黃曲霉毒素B1 10 μg/L XIC色譜圖

      3.jpg

      黃曲霉毒素B2 10 μg/L XIC色譜圖

       4.jpg

      黃曲霉毒素G1 10 μg/L XIC色譜圖

       5.jpg

      黃曲霉毒素G2 10 μg/L XIC色譜圖

       6.jpg

      黃曲霉毒素M1 10 μg/L XIC色譜圖

      花生油和糧谷中黃曲霉毒素檢測—UPLC-MS/MS法相關(guān)產(chǎn)品信息:

      貨號

      名稱(chēng)

      規格

      樣品前處理

      65915

      ProElut AFT-3

      12 mL, 20/pk

      244358

      12管防交叉污染真空SPE萃取裝置

      12位

      4806

      考克(控制流量)

      15/pk

      99011

      真空/正壓兩用泵,無(wú)油

      1/pk

      99013

      抽濾瓶套裝

      (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞)

      1/pk

      30039

      FitMax針頭式過(guò)濾器 Nylon

      13 mm,0.22 μm 100/pk

      30040

      FitMax針頭式過(guò)濾器 Nylon

      13 mm,0.45 μm 100/pk

      標準品

      82O-S02017-1ML

      黃曲霉毒素B1(AFB1) [1162-65-8]

      2 μg/mL溶于乙腈, 1 mL

      82O-S02018-1ML

      黃曲霉毒素B2(AFB2) [7220-81-7]

      0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL

      82O-S02019-1ML

      黃曲霉毒素G1(AFG1) [1165-39-5]

      2 μg/mL溶于乙腈, 1 mL

      82O-S02020-1ML

      黃曲霉毒素G2(AFG2) [7241-98-7]

      0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL

      82O-S02030-1ML

      黃曲霉毒素M1(AFM1) [6795-23-9]

      0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL

      色譜柱及保護柱

      86005

      Leapsil C18 2.7 μm UHPLC/HPLC

      兼容反相色譜柱

      100×2.1 mm,2.7 μm

      HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑

      50101

      乙腈  HPLC級

      4 L

      50144

      甲酸  HPLC級

      50 mL

      通用色譜產(chǎn)品

      52401B

      瓶架/藍色(現貨)

      50孔

      52401A

      瓶架/白色(現貨)

      50孔

      1034

      樣品瓶(棕色/螺紋)

      2 mL, 100/pk

      1035

      樣品瓶蓋/含墊(已經(jīng)組裝)

      100/pk

      H80465

      HPLC 進(jìn)樣針

      25 μL

      紅色產(chǎn)品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*

       

    北京迪科馬科技有限公司(迪馬科技)

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