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液相色譜儀由高壓液體泵分離系統、檢測器及液相色譜柱(含柱溫控制系統)等三部分組成。其中液相色譜柱是液相色譜工作的關(guān)鍵,液相色譜柱的性能直接關(guān)系到分離分析的準確性與適用性。
液相色譜柱的分類(lèi)方法很多,可按鍵合相類(lèi)型、用途(分析型與制備型)、基質(zhì)種類(lèi)等進(jìn)行分類(lèi)。
1 、硅膠基質(zhì)柱(4大類(lèi))
目前,分析型液相色譜柱多為硅膠基質(zhì)柱,細分為:
高純硅膠柱:以高純度硅烷化硅膠(Silica)為填料,應用范圍較廣,但只能在PH2.0-7.5,小于60度的條件下使用。又由于強極性硅羥基(Si-OH)的次級保留效應較強,所以應用受到局限,已被鍵合相柱所取代。
反相硅膠柱:是以硅烷化硅膠為基質(zhì),表面鍵合弱極性官能團的固定相。目前多用C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(phenyl,苯基)等。用于分離大多數有機化合物,應用范圍廣。
正相硅膠柱:是以硅烷化硅膠為基質(zhì),表面鍵合極性官能團的固定相。目前較多的為:NH2—(氨基)、CN—(氰基)、DIOL(二羥基,也常做HILIC單獨分類(lèi)列出,多用于分離有機酸、蛋白質(zhì)等)。多用于分離光學(xué)異構體和反相柱子不能分離的極性比較大的物質(zhì)。
離子交換柱:是以硅烷化硅膠為基質(zhì),以磺化交聯(lián)鍵合強陽(yáng)/陰離子基團(磺酸鹽/季銨堿)的固定相,又分為強酸性、強堿性、弱酸性、弱堿性等不同規格。用于分離解離性較強的有機鹽類(lèi)化合物。(注意:不要同離子色譜混淆,離子色譜主要是分離無(wú)機鹽類(lèi)化合物或某些帶點(diǎn)離子。)
2、聚合物基質(zhì)柱
聚合物基質(zhì)柱是指采用聚苯乙烯—二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸脂、多孔性微球蛋白等聚合物凝膠作為主要填料的一類(lèi)色譜柱。其相對于硅膠柱具有更強的疏水性及更寬泛的pH范圍(1.0~14.0),但柱效較低,目前主要應用于凝膠滲透色譜(GPC)、凝膠過(guò)濾色譜(GFC)及分子排阻色譜(MEC)。主要用于分離蛋白質(zhì)類(lèi)等大分子化合物。
3、其他無(wú)機物填料柱
這類(lèi)色譜柱于特殊用途,主要有石墨化碳、氧化鋁(Al2O3)、氧化鋯(ZrO2)等填料。不需要進(jìn)行表面改性,其自身表面即可對各類(lèi)化合物有強保留??稍谌我鈖H(氧化鋁除外,不能大于12.0)及高溫度(可達100℃)下使用。其中,石墨化碳填料柱能分離多種化合物,主要用于分離幾何異構體;氧化鋁柱剛性強,柱床穩定,可分離多種化合物且多用于制備色譜;氧化鋯柱較氧化鋁柱有更強的pH適用范圍及能耐受更高的溫度,但其應用尚待進(jìn)一步研究。
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