液相色譜柱選擇的方法和條件
①填料基質(zhì)
a.硅膠基質(zhì)：純度高本錢(qián)低，強度大，化學(xué)修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩定，但經(jīng)過(guò)特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩定在pH1.5-10。
b.聚合物基質(zhì)：應用pH值范圍寬，溫度穩定(高溫可以達到80度以上)，機械強度小。
②顆粒外形
大多現代HPLC填料都是球形顆粒，但有時(shí)是不規則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩定性以及較長(cháng)的柱壽命在使用高粘度的活動(dòng)相時(shí);不規則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價(jià)格。
③顆粒粒徑
粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時(shí)會(huì )導致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
④含碳量
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進(jìn)步柱容量、分辨率及分析時(shí)間，用于要求高分離度的復雜樣品;低含碳量分析時(shí)間短、展現不同的選擇性，用于快速分析簡(jiǎn)單樣品及需要高含水活動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
⑤孔徑和比表面積
HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒，盡大多數的反應表面于孔內。因此，分子必須進(jìn)進(jìn)孔內才能被吸附和分離。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念?？讖叫”缺砻娣e大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應，增加保存,上樣量和復雜成分的分離度;比表面積小，平衡時(shí)間快，適合梯度分析。
⑥孔容和機械強度
孔容，又稱(chēng)“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應填料的機械強度?？左w積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱?？左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
⑦封端封端
封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對封端鍵合相會(huì )產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品。
液相色譜柱在使用過(guò)程中易出現的問(wèn)題和解決辦法
色譜柱在使用中常見(jiàn)的問(wèn)題就是柱壓升高，如果柱壓是在長(cháng)時(shí)間使用過(guò)程中緩慢增加，屬于正?，F象。但柱壓在使用過(guò)程中突然升高（系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外），可能的原因有如下幾點(diǎn)：
(1)色譜柱頭的過(guò)濾篩板堵塞或污染；
(2)色譜柱頭的填料被樣品污染；
(3)色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結晶析出；
(4)流動(dòng)相pH值過(guò)大或過(guò)小使固定相結構破壞或溶解。
解決辦法如下：
(1)如確定是色譜柱頭的過(guò)濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10%的稀硝酸內超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
(2)如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。
(3)如確定定是鹽結晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
(4)如果因pH值使用不當，很難恢復。
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