3.一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì )迅速降低柱效。

　　4.選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

　　5.經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對流路系統中流動(dòng)相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應是柱體積的20倍左右。

　　(下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動(dòng)相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類(lèi)脂。有時(shí)也注射二甲亞砜數次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。陽(yáng)離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機物)、甲醇、水依次沖洗。)

　　6.保存色譜柱時(shí)應將柱內充滿(mǎn)乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間。

　　7.色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時(shí)應更換濾片或將其取出進(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開(kāi)柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1～2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內相同)填滿(mǎn)色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5～30mm)，可以起到保護、延長(cháng)柱壽命的作用。采用保護柱會(huì )損失一定的柱效，這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH=2～9范圍內使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著(zhù)在柱頂的填料上。

　　8.新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補加填料使柱效恢復。每次工作完后，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如，ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會(huì )腐蝕不銹鋼管道，不宜長(cháng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應每隔4～5天開(kāi)機沖洗15分鐘。