液相色譜柱按照其色譜分離模式來(lái)分，大致可分為正相、反相、離子交換、疏水作用、體積排除、親和以及手性等類(lèi)型。其中反相色譜柱是以鍵合非極性基團的載體為填充劑填充而成的色譜柱。

　　反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱(chēng)為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等。

　　反相色譜柱的影響因素：

　　(1)柱長(cháng)

　　有機小分子和肽類(lèi)的分辨率隨柱長(cháng)的增加而增加.但是柱長(cháng)增加并不能使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率顯著(zhù)增加.它們在較短的柱子上往往也有很好的分離效果。

　　(2)流動(dòng)相的流速。

　　有機小分子和肽類(lèi)的分辨率對流動(dòng)相流速非常敏感。而蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率則不然。流速越小，柱子越長(cháng)，色譜峰的寬度就越大，分辨率就越小。制備色譜上樣過(guò)程中的流速對動(dòng)態(tài)吸附容量影響很大。

　　(3)溫度。

　　溫度上升，流動(dòng)相黏度下降，流動(dòng)速度加快，且流動(dòng)相與固定相之間的傳質(zhì)速度加快，使分辨率增加。同時(shí)，溫度上升，分子熱運動(dòng)增加，疏水性作用減弱。升高溫度要考慮目標物質(zhì)的熱穩定性。

　　(4)流動(dòng)相組成。

　　流動(dòng)相的極性越大，溶質(zhì)的分配系數越大，洗脫時(shí)間越短。RPC多采用降低流動(dòng)相極性(水含量)的線(xiàn)性梯度洗脫法。水是極性zui強的溶劑，在反相色譜中常常和基礎溶劑配合使用，向流動(dòng)相中加入不同濃度的、可以與水混溶的有機溶劑，以得到不同強度的流動(dòng)相，這些有機溶劑稱(chēng)為修飾劑。反相色譜中zui常用的有機溶劑有甲醇和乙腈。此外，乙醇、四氫呋喃、異丙醇及二氧六環(huán)也常被用作修飾劑。有機溶劑梯度的大小也會(huì )影響分辨率，一般梯度越小.分辨率越大。